Berita

Javascript sedang dilumpuhkan dalam penyemak imbas anda.Sesetengah ciri tapak web ini tidak akan berfungsi jika JavaScript dilumpuhkan.
Daftar dengan butiran khusus anda dan ubat khusus yang diminati, dan kami akan memadankan maklumat yang anda berikan dengan artikel dalam pangkalan data kami yang luas dan menghantar salinan PDF kepada anda dengan segera.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Jabatan Penyakit Berjangkit, Hospital Gabungan Pertama Universiti Suzhou, Bandar Suzhou, Wilayah Jiangsu, 215000 Tel.tumor sistem pencernaan dengan kemandirian keseluruhan 5 tahun sebanyak 14.1%.Ramai pesakit dengan HCC didiagnosis pada peringkat lanjut, jadi pemeriksaan awal adalah penting untuk mengurangkan kematian akibat HCC.Sebagai tambahan kepada penunjuk pengesanan yang biasa digunakan seperti serum alpha-fetoprotein (AFP), lectin-reactive alpha-fetoprotein (AFP-L3), dan protrombin abnormal (protein II akibat kekurangan vitamin K, PIVKA-II), teknik biopsi cecair Ia telah terbukti mempunyai nilai diagnostik dalam pengesanan HCC.Berbanding dengan prosedur invasif, biopsi cecair boleh mengesan metabolit malignan yang beredar.Teknik biopsi cecair mengesan sel tumor yang beredar, DNA tumor yang beredar, RNA yang beredar, dan eksosom dan digunakan untuk pemeriksaan awal, diagnosis, dan penilaian prognostik HCC.Artikel ini mengkaji biologi molekul dan aplikasi pelbagai teknik biopsi cecair untuk mengasingkan biomarker yang menjanjikan yang mungkin menjadi pilihan berdaya maju untuk penilaian awal HCC untuk meningkatkan pemeriksaan awal kumpulan HCC berisiko tinggi.Kata kunci: teknik biopsi cecair, karsinoma hepatoselular, kumpulan berisiko tinggi.
Karsinoma hepatoselular (HCC) ialah tumor malignan biasa pada saluran penghadaman, menduduki tempat keenam dalam kalangan kes baharu tumor malignan pada lelaki dan wanita.1 Di seluruh dunia, kanser hati adalah penyebab utama kematian kanser ketiga selepas kanser paru-paru dan kolorektal, menyumbang 8.3% kematian berkaitan kanser daripada semua neoplasma malignan.1 Prognosis HCC berkait rapat dengan peringkat pada diagnosis.Sebab utama untuk kelangsungan hidup yang lemah dalam HCC adalah metastasis intrahepatik, trombi tumor vena portal, dan metastasis jauh yang menghalang reseksi, dan banyak ciri ini sudah ada pada pesakit pada masa diagnosis.
Berdasarkan garis panduan diagnostik dan rawatan, faktor risiko utama untuk membangunkan HCC ialah sirosis hati, virus hepatitis B kronik (HBV) atau jangkitan virus hepatitis C (HCV), penyakit hati berlemak alkohol dan penyakit hati berlemak bukan alkohol (NAFLD). ).2 Selain itu, faktor risiko untuk HCC termasuk pengambilan makanan yang tercemar aflatoksin, schistosomiasis, punca lain sirosis, sejarah keluarga kanser hati, diabetes, obesiti, merokok dan kecederaan hati yang disebabkan oleh dadah.Kumpulan berisiko tinggi berumur 35 dan 45 tahun harus menjalani pemeriksaan kesihatan secara berkala.Pemeriksaan awal adalah strategi rawatan awal yang penting untuk meningkatkan kemandirian keseluruhan pesakit dengan HCC.
Penanda bio seperti AFP, AFP-L3 dan PIVKA-II disyorkan untuk pemeriksaan awal HCC3,4.Teknik biopsi cecair telah menunjukkan hasil yang menjanjikan dalam diagnosis awal dan penilaian rawatan.5,6 Kemajuan ketara telah dibuat dalam biopsi cecair HCC, yang mungkin mempunyai sensitiviti dan kekhususan yang lebih tinggi daripada penanda serum yang biasa digunakan seperti AFP (Jadual 1).
AFP ialah biomarker yang digunakan secara meluas dalam HCC dan kini merupakan biomarker paling terperinci yang digunakan secara meluas untuk pemeriksaan awal, diagnosis dan penilaian penyakit.Tahap AFP yang terus meningkat dianggap sebagai faktor risiko untuk perkembangan HCC.7,8 Kadar pengesanan karsinoma hepatoselular kecil (sHCC) semakin meningkat dengan perkembangan ultrasound dan tomografi berkomputer, dan AFP didapati tidak sensitif terhadap pengesanan hHCC dalam amalan klinikal.Menurut kajian berbilang pusat retrospektif9, AFP positif didapati dalam 46% (616/1338) kes HCC dan 23.4% (150/641) kes sHCC.Di samping itu, tahap AFP dinaikkan pada pesakit dengan penyakit hati kronik dan sirosis.10 Oleh itu, AFP mempunyai kesan saringan terhad untuk sHCC.11 Menurut Garis Panduan Amalan Klinikal Asia-Pasifik untuk Karsinoma Hepatoselular, penggunaan AFP tidak digalakkan.12 Bukti klinikal menunjukkan bahawa PIVKA-II lebih unggul daripada AFP dalam rawatan HCC dan gabungan PIVKA-II dan AFP mempunyai nilai diagnostik yang lebih tinggi dalam HCC.13 Berbanding dengan biopsi tisu, biopsi cecair terutamanya mengesan metabolit yang berkaitan dengan tumor dalam cecair badan (darah, air liur, cecair pleura, cecair serebrospinal atau air kencing) dan kurang invasif kepada tisu.14 Di samping itu, biopsi cecair mungkin mencerminkan ciri-ciri malignan yang tidak terdapat dalam tisu tumor primer.15 Biopsi cecair belum lagi diuji dalam amalan klinikal untuk semua jenis tumor, tetapi potensi diagnostiknya dalam kanser menarik perhatian pakar onkologi.16 Biopsi cecair boleh mengesan sel tumor yang beredar (CTC), DNA tumor yang beredar (cDNA), RNA bebas yang beredar (ecRNA), dan eksosom.Dalam artikel ini, kita akan membincangkan ciri, peranan dan aplikasi pelbagai teknik biopsi cecair dalam pemeriksaan awal kumpulan HCC berisiko tinggi.
DNA ekstraselular (cfDNA) dalam sampel darah daripada individu yang sihat pertama kali diterangkan pada tahun 1948 oleh Mandel et al.17 cfDNA ialah serpihan DNA bebas sel kira-kira 160-180 bp panjang, yang berasal terutamanya daripada limfosit dan sel mieloid.ctDNA ialah serpihan DNA mutan khusus yang dikeluarkan oleh sel tumor ke dalam darah periferi, yang mewakili maklumat genomik sel tumor selepas proses patofisiologi tertentu, termasuk nekrosis, apoptosis dan perkumuhan.Perkadaran ctDNA dalam jumlah cfDNA berbeza-beza mengikut jenis tumor, dan serpihan cDNA dilaporkan biasanya kurang daripada 167 bp panjang.18 Kajian Underhill menunjukkan bahawa serpihan cfDNA secara amnya lebih pendek daripada cfDNA biasa.19 Berbanding dengan individu yang sihat, jumlah panjang serpihan cfDNA dalam darah pesakit kanser adalah lebih pendek, jadi cfDNA boleh digunakan sebagai penunjuk pemeriksaan tumor awal.Pengayaan subset tertentu panjang serpihan cfDNA boleh meningkatkan pengesanan cDNA yang dikaitkan dengan tumor pepejal bukan metastatik.Kajian telah menunjukkan bahawa ctDNA ditemui dalam lebih 75% kanser pankreas, kolon, pundi kencing, gastrousus, hati, ovari, payudara, melanoma, dan kepala dan leher yang lebih maju.20,21 Walau bagaimanapun, jumlah ctDNA dalam darah bergantung kepada lokasi tumor.22 Dalam kajian oleh Bettegoud, pesakit yang menghidap kanser kolorektal, payudara, hati, paru-paru, dan prostat didapati mempunyai tahap cDNA yang lebih tinggi dalam darah mereka berbanding kanser lain.Sebaliknya, pada pesakit dengan kanser mulut, kanser pankreas, kanser gastrik, dan glioma, kepekatan cDNA dalam darah adalah lebih rendah.dua puluh satu
Oleh kerana ctDNA mengandungi mutasi genetik yang sama seperti sel tumor primer, cDNA boleh digunakan untuk mengesan mutasi spesifik tumor heterogen dan perubahan epigenetik, termasuk metilasi, hidroksimetilasi, variasi nukleotida tunggal dan variasi nombor salinan.dua puluh tiga
Metilasi DNA adalah salah satu perubahan epigenetik yang paling biasa yang mengakibatkan penindasan gen.Berbanding dengan sel normal, terdapat perbezaan dalam tahap keseluruhan metilasi genom sel tumor, terutamanya dalam metilasi gen penindas tumor, yang boleh dikesan pada peringkat awal, menunjukkan bahawa perubahan dalam metilasi DNA mungkin menjadi penunjuk awal. pengesanan tumorigenesis.Gen penindas tumor yang dikaitkan dengan HCC boleh dinyahaktifkan oleh metilasi promoter, dengan itu merangsang tumorigenesis.24 Metilasi DNA ialah penanda ideal untuk diagnosis awal tumor kerana kekhususan tisu, kebolehkesanan dan kebebasan umur.Di samping itu, metilasi DNA adalah lebih biasa berbanding dengan mutasi somatik kerana terdapat lebih banyak kawasan sasaran dan beberapa tapak CpG yang diubah dalam setiap kawasan genom sasaran.25 Sebagai tambahan kepada berbilang tapak CpG, sejumlah besar lokus hipermetilasi bebas dalam ctDNA telah dikenal pasti dalam DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1, dan RGS10.26 Xu et al.Perbandingan sampel cfDNA daripada 1098 pesakit HCC dan 835 kawalan sihat adalah gen yang dikaitkan dengan HCC didapati sangat berkorelasi dengan tandatangan metilasi cDNA plasma yang sepadan.25 Berdasarkan analisis makmal, model ramalan telah dibangunkan yang mengandungi 10 penanda metilasi dengan kepekaan dan kekhususan masing-masing 85.7% dan 94.3%, dan penanda ini sangat berkorelasi dengan jisim tumor, peringkat tumor, dan tindak balas terhadap rawatan.Keputusan ini menunjukkan bahawa penggunaan penanda metilasi cDNA sangat menjanjikan dalam diagnosis, pemantauan, dan prognosis HCC.Dalam model metilasi yang terdiri daripada tiga gen metilasi yang menyimpang (APC, COX2, RASSF1A) dan satu miRNA (miR203) yang dibentangkan oleh Lu et al27, sensitiviti dan kekhususan model 27 untuk mendiagnosis HCC yang berkaitan dengan HBV adalah setanding.80%.Di samping itu, model itu boleh mengesan 75% pesakit HCC yang tidak didiagnosis dengan tahap AFP 20 ng/mL.Gen untuk protein keluarga domain Ras-associated 1A (RASSF1A) adalah urutan DNA berulang utama dalam genom manusia.Araujo et al.membuat kesimpulan bahawa hipermetilasi promoter RASSF1A boleh menjadi biomarker yang berharga untuk pemeriksaan awal HCC dan sasaran molekul yang berpotensi untuk terapi epigenetik.28 Dalam satu kajian, hipermetilasi promoter RASSF1A serum didapati dalam 73.3% pesakit dengan HCC.29 Elemen nukleotida berselang panjang 1 (LINE-1) ialah satu lagi mediator retrotransposisi yang sangat aktif.Hypomethylation LINE-1 ditemui dalam DNA 66.7% sampel serum HCC dan dikaitkan dengan pengulangan awal dan kelangsungan hidup yang lemah selepas reseksi radikal.29 Hipermetilasi ialah proses genetik biasa yang memainkan peranan unik dalam perkembangan sirosis hati dan HCC.30 Sebaliknya, hidroksimetilasi ialah proses demetilasi yang mendorong pengaktifan dan ekspresi gen, dan pengesanan produk 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC) dalam proses ini boleh digunakan untuk mengenal pasti tumor.Metilasi dan hidroksimetilasi cDNA dikaitkan dengan tumorigenesis dan boleh menyumbang kepada pemeriksaan awal HCC.Dalam kajian terhadap 2554 subjek, 31 5-hmC yang luas genom ditemui dalam sampel cfDNA, dan 32 gen telah dikenal pasti dengan membandingkan urutan 5-hmC dalam pesakit HCC dan kumpulan berisiko tinggi seperti mereka yang mempunyai penyakit kronik.Model diagnostik penyakit hati.dan sirosis.Model ini lebih unggul daripada AFP dalam membezakan HCC daripada tisu bukan tumor.
Mutasi dalam kawasan pengekodan boleh menyebabkan keabnormalan transkrip, yang boleh membawa kepada perubahan dalam urutan protein dan akhirnya kanser.Varian nukleotida tunggal adalah penanda genomik yang penting untuk pemeriksaan tumor awal kerana kebolehpercayaan tisu yang tinggi dan kekhususan tumor dan tisu yang tinggi.Banyak kajian berkaitan HCC menggunakan penjujukan generasi akan datang (NGS) untuk penjujukan exome dan keseluruhan genom kanser telah mengenal pasti gen selular bermutasi biasa seperti TP53 dan CTNNB1, serta beberapa termasuk ARID1A, MLL, IRF2.Gen baharu, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 dan JAK1 menunjukkan kadar mutasi sederhana. Analisis fungsi gen mutan mencadangkan bahawa perubahan dalam pembentukan semula kromatin, transduksi isyarat Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, laluan kitaran sel P53, pengubah epigenetik, laluan tekanan oksidatif, laluan PI3K/AKT/MTOR dan RAS/RAF/ Laluan kinase MAPK memainkan peranan penting dalam onkogenesis HCC.32,33 Dalam kajian di mana mutasi berkaitan tumor dikesan, Huang et al mendapati bahawa kekerapan mutasi berkaitan tumor bergantung kepada ctDNA ialah 19.5%, dan kekhususan adalah 90% .34 Selain itu, pesakit yang mengalami pencerobohan vaskular lebih berkemungkinan mengalami mutasi ctDNA (P=0.041) dan kelangsungan hidup tanpa berulang yang lebih pendek (P<0.001). Analisis fungsi gen mutan mencadangkan bahawa perubahan dalam pembentukan semula kromatin, transduksi isyarat Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, laluan kitaran sel P53, pengubah epigenetik, laluan tekanan oksidatif, laluan PI3K/AKT/MTOR dan RAS/RAF/ Laluan kinase MAPK memainkan peranan penting dalam onkogenesis HCC.32,33 Dalam kajian di mana mutasi berkaitan tumor dikesan, Huang et al mendapati bahawa kekerapan mutasi berkaitan tumor bergantung kepada ctDNA ialah 19.5%, dan kekhususan adalah 90% .34 Selain itu, pesakit yang mengalami pencerobohan vaskular lebih berkemungkinan mengalami mutasi ctDNA (P=0.041) dan kelangsungan hidup tanpa berulang yang lebih pendek (P<0.001).Analisis fungsi gen mutan mencadangkan bahawa perubahan dalam pembentukan semula kromatin, isyarat Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, laluan kitaran sel P53, pengubah epigenetik, laluan tekanan oksidatif, laluan PI3K/AKT/MTOR dan laluan kinase RAS/RAF/MAPK memainkan peranan. peranan kritikal dalam tumorigenesis HCC.32,33 Dalam kajian yang mendapati mutasi berkaitan tumor, Huang et al.mendapati bahawa kekerapan mutasi berkaitan tumor yang bergantung kepada ctDNA adalah 19.5% dan kekhususan adalah 90%..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) dan болызией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) dan болызие кодица (1 болызее котротки) . .34 Selain itu, pesakit dengan pencerobohan vaskular mempunyai lebih banyak mutasi cDNA (P=0.041) dan kelangsungan hidup bebas penyakit yang lebih pendek (P<0.001).Analisis fungsi gen mutan mendedahkan pembentukan semula kromatin, isyarat Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, laluan kitaran sel P53, pengubah epigenetik, laluan tekanan oksidatif, laluan PI3K/AKT/MTOR, dan RAS/RAF/MAPK laluan kinase memainkan peranan penting dalam onkogenesis HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中, Huang 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctDNA 的 频率 为 为 为 为 为 为 为 为 发生 的 的 的 侵犯 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究, Huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctDNA 的 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 发生 更 可能 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生短的无复发生存期（P<0.001）。32,33 Dalam kajian yang mendapati mutasi berkaitan tumor, Huang et al.mendapati bahawa mutasi yang berkaitan dengan tumor adalah 19.5% bergantung kepada cDNA dengan kekhususan 90% 34. Selain itu, pesakit yang telah mengalami pencerobohan vaskular lebih berkemungkinan untuk membangunkan cDNA.мутация (P = 0,041) dan более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutasi (P=0.041) dan kelangsungan hidup bebas penyakit yang lebih pendek (P<0.001).Satu lagi gen pemacu HCC biasa ialah TP53, yang mempunyai kadar mutasi lebih 30%.Kajian telah menunjukkan bahawa kekerapan mutasi TP53 dalam ctDNA dalam darah dan air kencing berkisar antara 5% hingga 60%.35 Kajian Johan menunjukkan bahawa spektrum mutasi ctDNA pada HCC lewat mempunyai kadar mutasi yang sama dengan HCC awal, termasuk promoter TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutasi dalam AXIN1 ., ARID2, KMT2D dan TSC2 (6% setiap satu).36 Onkogen β-catenin (CTNNB1) memainkan peranan penting dalam laluan isyarat Wnt.Coactivator transkripsi CTNNB1 boleh menggalakkan ekspresi gen, yang boleh membawa kepada percambahan sel, perencatan apoptosis, dan angiogenesis.CTNNB1 juga boleh berinteraksi dengan TERT untuk mendorong transformasi hepatosit.33 Penganjur TERT sering bermutasi dalam beberapa tumor pepejal.Perubahan dalam TERT, salah satu perubahan genetik terawal dalam transformasi malignan HCC, boleh membawa kepada pengaktifan semula telomerase dalam hepatosit sirosis dan boleh menggalakkan percambahan dan mencegah penuaan.Mutasi dalam promoter 33-37 TERT telah dilaporkan berlaku pada 59-90% pesakit dengan nodul hati proliferatif dan HCC awal dan dikaitkan dengan kelangsungan hidup.38
Perubahan nombor salinan (CNA) ialah subjenis penting mutasi somatik.Penyelidikan telah menunjukkan bahawa beban CNA yang meluas dan fokus adalah tandatangan genomik yang mampu meramalkan penyusupan imun tumor dan pengecualian dalam beberapa jenis kanser.39 Isyarat penyusupan aktif, aktiviti sitolitik yang tinggi, keradangan teruk dan penanda genetik yang dikaitkan dengan pembentangan antigen dalam HCC.Analisis susunan data polimorfisme nukleotida tunggal dalam 477 subjek mendedahkan beban yang rendah pada CNS.Sebaliknya, tumor kromosom yang tidak stabil dengan beban CNA yang tinggi menunjukkan tanda-tanda penolakan imun dan dikaitkan dengan percambahan, pembaikan DNA, dan disfungsi TP53.Xu et al.menunjukkan bahawa kumpulan HCC mempunyai skor CNA yang lebih tinggi daripada kumpulan penyakit hati kronik.40 Menggunakan penjujukan genom keseluruhan sel tunggal, CNA didapati muncul awal dalam hepatokarsinogenesis dan kekal stabil semasa perkembangan tumor.41 Chung et al.mendapati bahawa tahap cfDNA meningkat dengan ketara dalam pesakit HCC dan CNA seluruh genom dalam cfDNA adalah penanda prognostik bebas yang penting dalam pesakit HCC yang dirawat dengan sorafenib.42 Pesakit dengan beban CNA yang lebih tinggi lebih berkemungkinan mengalami perkembangan penyakit dan kematian berbanding mereka yang mempunyai beban CNA yang lebih rendah.Ollerich et al.mendapati bahawa indeks ketidakstabilan nombor salinan (CNI) boleh digunakan untuk menilai CNA dalam cfDNA pesakit kanser.Mereka menyatakan bahawa pesakit dengan kanser lanjutan mempunyai skor CNI yang jauh lebih tinggi daripada kumpulan kawalan, yang menilai tindak balas pesakit terhadap kemoterapi sistemik dan imunoterapi.43 Keputusan ini menunjukkan bahawa CNA yang terdapat dalam spesimen biopsi cecair boleh berfungsi sebagai penunjuk prognostik pada pesakit dengan kanser lanjutan.HCC pada latar belakang terapi sistemik.
Pada masa ini, kaedah yang digunakan untuk mengesan ctDNA boleh dibahagikan kepada kaedah disasarkan dan tidak disasarkan.Secara ringkas, kaedah yang disasarkan seperti tindak balas rantai polimerase digital (dPCR), PCR digital BEAMing, Sistem Mutasi Refraktori Penguatan-PCR, Capp-Seq dan Tam-Seq sangat sensitif kepada gen yang telah ditetapkan.Kaedah luar sasaran seperti penjujukan genom keseluruhan dan NGS memberikan pandangan menyeluruh tentang keseluruhan landskap genom.44 Berbanding dengan panel sasaran, penjujukan genom keseluruhan boleh mengesan bukan sahaja mutasi titik dan sisipan, tetapi juga penyusunan semula dan variasi nombor salinan.prognosis, dan CTC dan cfDNA adalah penunjuk yang baik yang boleh digunakan untuk pemantauan dinamik HCC.45 Selain itu, analisis cfDNA mungkin lebih berguna dalam mengesan HCC.Yan et al.menunjukkan bahawa cfDNA dalam plasma pesakit dengan HCC adalah jauh lebih tinggi daripada pesakit dengan fibrosis hati dan kawalan yang sihat.Berbanding dengan AFP, ctDNA dijangka menjadi penanda saringan yang lebih baik untuk HCC awal.46 Dalam kajian prospektif terhadap 47 biopsi cecair yang menguji cfDNA dan protein dalam populasi populasi, mereka telah ditunjukkan berkesan dalam membezakan pesakit dengan HCC daripada pesakit tanpa HCC.Dalam susulan 331 pesakit ultrasound normal dan AFP-negatif, sensitiviti dan kekhususan cfDNA untuk mendiagnosis HCC masing-masing adalah 100% dan 94%, jadi cDNA boleh mengesan HCC dalam individu seropositif HBsAg tanpa gejala.Dalam kajian Yeo48, frekuensi tinggi (92.5%) hipermetilasi promoter RASSF1A didapati pada pesakit dengan HCC.Di samping itu, Xu et al.mencipta model diagnostik untuk meramalkan HCC menggunakan panel penanda metilasi khusus dengan kekhususan dan kepekaan masing-masing 90.5% dan 83.3%.Panel itu membolehkan pesakit dengan HCC dibezakan daripada pesakit dengan penyakit hati lain, yang lebih baik daripada AFP.Mereka juga mendapati bahawa kawalan biasa yang diuji positif mungkin mempunyai faktor risiko untuk HCC, seperti jangkitan HBV atau sejarah penggunaan alkohol.25 Kami membuat hipotesis bahawa faktor berisiko tinggi untuk HCC boleh menggalakkan hipermetilasi cfDNA, yang kemudian menyumbang kepada perkembangan HCC, dan dengan itu cfDNA mungkin memainkan peranan penting dalam pemeriksaan untuk kumpulan berisiko tinggi.Cai et al.meringkaskan rangkaian penuh mutasi ctDNA dan menawarkan strategi yang mantap untuk menilai beban tumor pada pesakit.49 Strategi ini boleh mengenal pasti tumorigenesis median 4.6 bulan sebelum perubahan pengimejan dan telah menunjukkan prestasi diagnostik yang unggul berbanding dengan biomarker serum AFP, AFP-L3, dan PIVKA-II.Nilai diagnostik ujian cDNA telah ditunjukkan apabila penilaian imej tidak tersedia, jadi ujian cDNA mempunyai nilai dalam diagnosis HCC awal dalam kumpulan berisiko tinggi.Baru-baru ini, saintis menggunakan teknologi NGS untuk menganalisis penunjuk variasi genetik multivariate (termasuk 5-hydroxymethylcytosine, 5'-motif, pemecahan, surih nukleosom, HIFI) dalam 3204 sampel klinikal dan cfDNA.50 Model HIFI yang disahkan semula dengan tiga set kereta api, ujian dan ujian bebas menunjukkan diskriminasi yang stabil dan boleh dipercayai antara populasi HCC dan bukan HCC dengan sensitiviti 95.79% dan 95.42% dalam set ujian dan ujian khusus HCC.Jantina adalah 95.00% dan 97.83%, masing-masing.Nilai diagnostik kaedah HIFI adalah lebih tinggi daripada AFP dalam membezakan HCC daripada sirosis.Selain itu, ctDNA juga digunakan dalam rawatan pembedahan.Atsushi et al.menentukan tahap serum praoperasi ctDNA pada pesakit dengan HCC dan mendapati bahawa kadar berulang dan kadar metastasis ekstrahepatik dalam kumpulan positif cDNA adalah lebih tinggi daripada kumpulan negatif cDNA, dan tahap cDNA berkorelasi dengan ketara.dengan perkembangan tumor.51 Sebagai penanda bio yang sangat sensitif, ctDNA boleh meramalkan keupayaan HCC untuk menyerang kapal.Wang et al.melakukan penjujukan genom keseluruhan 46 pesakit dengan HCC, dan analisis multivariate menunjukkan bahawa nilai ambang frekuensi alel varian cDNA untuk pencerobohan ke dalam kapal mikro ialah 0.83%, sensitiviti 89.7% dan kekhususan 80.0%.faktor risiko bebas untuk pencerobohan mikrovaskular dalam HCC yang boleh direseksi, menunjukkan bahawa cDNA boleh membantu membimbing rawatan yang optimum.Kesimpulannya, ctDNA terlibat sepenuhnya dalam kejadian dan perkembangan HCC dan boleh digunakan untuk pemeriksaan awal, penilaian pembedahan, dan pemantauan penyakit.
CTC adalah sel malignan yang berasal daripada tumor primer atau metastasis yang bermetastasis ke aliran darah.Sel-sel tumor merembeskan matriks metalloproteinase (MMPs), yang memecahkan membran bawah tanah, membolehkan sel-sel tumor memasuki terus ke saluran darah dan limfa.Walau bagaimanapun, kebanyakan CTC dihapuskan dengan cepat oleh anoikis, serangan imun, atau tegasan ricih.53 Peralihan epithelial-mesenchymal (EMT) membolehkan CTC untuk diasingkan dengan mudah daripada tisu tumor primer, menyerang kapilari, dan memperoleh kelangsungan hidup yang lebih baik, metastasis, invasif dan rintangan dadah.Kajian telah menunjukkan bahawa terdapat heterogeniti yang mendalam di antara pelbagai sel tumor dalam tumor metastatik primer.Oleh itu, analisis CTC boleh membawa kepada pemahaman yang komprehensif tentang heterogenitas sel tumor.54
Penanda khusus untuk CTC berkaitan HCC termasuk glypican-3 (GPC3), reseptor asialoglycoprotein (ASGPR), molekul lekatan sel epitelium (EpCAM) dan penanda berkaitan sel stem seperti CD44, CD90, 55 dan molekul lekatan antara sel 1 (ICAM1).) .56 Penanda GPC3 ialah protein berlabuh membran sel yang digunakan secara klinikal untuk analisis patologi dan pencirian HCC.57 Ekspresi GPC3 adalah lebih biasa dalam sel tumor HCC dengan pembezaan pertengahan dan rendah dan menggalakkan penghijrahan ekstrahepatik;di samping itu, kehadiran GPC3+ CTC menunjukkan HCC metastatik.58 ASGPR ialah protein transmembran yang dinyatakan hanya pada permukaan hepatosit dan sangat dinyatakan dalam HCC yang dibezakan dengan baik.EpCAM ialah salah satu daripada protein berkaitan membran yang paling biasa digunakan untuk menangkap CTC.EpCAM telah dikenal pasti sebagai penanda permukaan sel HCC dengan ciri sel stem, 59 yang berkorelasi dengan pelbagai ciri klinikopatologi HCC, seperti pencerobohan vaskular, menilai tahap AFP, dan peringkat lanjut kanser hati di Hospital Barcelona (BCLC).Fenotip 60 CTC EMT adalah sangat metastatik.54 proses EMT dalam CTC menggalakkan metastasis HCC.Ekspresi penanda EMT seperti vimentin, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, siput, slug, dan E-cadherin telah dikaji dalam CTC yang berasal dari hati daripada pesakit HCC.58 Sistem CanPatrol™ yang dibangunkan oleh Cheng [61] mengelaskan CTC kepada tiga subkumpulan fenotip berdasarkan penanda yang dinyatakan secara dominan: fenotip epitelium (EpCAM, CK8/18/19), fenotip mesenkim (vimentin, bergelung), dan fenotip campuran.Dalam 176 pesakit, jumlah CTC lebih tinggi daripada AFP dalam membezakan HCC daripada penyakit hati benigna.Nilai AUC untuk jumlah CTC, AFP, dan jumlah gabungan CTC dan AFP ialah 0.774 (95% CI, 0.704–0.834), 0.669 (95% CI, 0.587–0.750), dan 0.821 (95% CI, 0.756–0.886 ).), masing-masing.Klasifikasi CTC berdasarkan EMT boleh meramalkan diagnosis HCC, pengulangan awal, metastasis, dan masa keseluruhan yang lebih pendek.
Pada masa ini, kaedah untuk mengesan CSC termasuk kaedah fizikal dan kaedah biologi.Kaedah fizikal, sering dirujuk sebagai pengayaan berdasarkan sifat biofizikal, bergantung terutamanya pada sifat fizikal CSC, seperti saiz, ketumpatan, cas, mobiliti dan kebolehubah bentuk.Bergantung pada sifat fizikal, terdapat pelbagai kaedah seperti sistem berasaskan penapisan, dielektroforesis, dsb. Yang terakhir, juga dikenali sebagai pengayaan berasaskan immunoaffinity, terutamanya berdasarkan pengikatan antigen-antibodi kerana kaedah itu menggunakan antibodi terhadap biomarker khusus tumor seperti EpCAM, ASGPR, reseptor faktor pertumbuhan epidermis manusia 2 (HER2), antigen khusus prostat (PSA), pancytokeratin manusia (P-CK) dan karbamoil fosfat sintase 1 (CPS1).62 Satu lagi jenis, dipanggil kaedah tanpa pengayaan, menggunakan sitometri aliran untuk membezakan CTC daripada leukosit berdasarkan nisbah dan saiz nuklear kepada sitoplasma yang lebih tinggi.Pada masa ini, satu-satunya ujian yang diluluskan oleh FDA untuk pengesanan CTC ialah sistem Cell-Search™, yang menggunakan penanda permukaan sel EpCAM. Walau bagaimanapun, pengesanan CTC berasaskan penanda gabungan boleh meningkatkan kadar positif.54 Campuran antibodi terhadap ASGPR dan CPS1 mencapai kadar pengesanan CTC sebanyak 91% dalam pesakit HCC.63 Zhang et al menggunakan CTC-Chip dengan antibodi terhadap ASGPR, P -CK dan CPS1, dan membezakan pesakit HCC daripada mereka yang mempunyai penyakit hati benigna atau kanser bukan HCC pada kadar 100%.64 Kajian oleh Wang mengesan EpCAM+ CTC dalam 60% daripada 42 pesakit HCC dan mendapati korelasi yang ketara antara kedua-dua positif. kadar dan bilangan CTC dengan peringkat TNM.65 Guo et al mendapati skor PCR terbitan CTC dinaikkan dalam 125/171 (73%) pesakit yang tahap AFPnya <20 ng/mL dengan sensitiviti 72.5% dan a kekhususan 95.0%, berbanding dengan 57.0% dan 90.0% untuk AFP pada cutoff 20 ng/mL.66 Gabungan AFP dan CTC boleh meningkatkan pengesanan HCC.45 Adalah dipercayai bahawa CTC mempunyai kelebihan berbanding AFP dalam pemeriksaan awal kumpulan berisiko tinggi untuk HCC. Walau bagaimanapun, pengesanan CTC berasaskan penanda gabungan boleh meningkatkan kadar positif.54 Campuran antibodi terhadap ASGPR dan CPS1 mencapai kadar pengesanan CTC sebanyak 91% dalam pesakit HCC.63 Zhang et al menggunakan CTC-Chip dengan antibodi terhadap ASGPR, P -CK dan CPS1, dan membezakan pesakit HCC daripada mereka yang mempunyai penyakit hati benigna atau kanser bukan HCC pada kadar 100%.64 Kajian oleh Wang mengesan EpCAM+ CTC dalam 60% daripada 42 pesakit HCC dan mendapati korelasi yang ketara antara kedua-dua positif. kadar dan bilangan CTC dengan peringkat TNM.65 Guo et al mendapati skor PCR terbitan CTC dinaikkan dalam 125/171 (73%) pesakit yang tahap AFPnya <20 ng/mL dengan sensitiviti 72.5% dan a kekhususan 95.0%, berbanding dengan 57.0% dan 90.0% untuk AFP pada cutoff 20 ng/mL.66 Gabungan AFP dan CTC boleh meningkatkan pengesanan HCC.45 Adalah dipercayai bahawa CTC mempunyai kelebihan berbanding AFP dalam pemeriksaan awal kumpulan berisiko tinggi untuk HCC.Walau bagaimanapun, pengesanan gabungan berasaskan penanda bagi CTC boleh meningkatkan peratusan keputusan positif.54 Campuran antibodi anti-ASGPR dan CPS1 mencapai kadar pengesanan CTC sebanyak 91% pada pesakit dengan HCC.63 Zhang et al.menggunakan CTC-Chip dengan antibodi terhadap ASGPR, P-CK dan CPS1, dan juga membezakan pesakit dengan HCC daripada mereka yang mempunyai penyakit hati benigna atau bukan HCC pada kadar 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. kekerapan dan bilangan CTC dengan peringkat TNM.65 Guo et al mendapati bahawa PCR yang diperoleh daripada CTC telah dinaikkan dalam 125/171 (73%) pesakit yang mempunyai tahap AFP <20 ng/mL dengan sensitiviti 72.5% dan kekhususan 95.0% berbanding 57.0% dan 90.0% untuk AFP pada tahap cut-off 20 ng/mL.66 Gabungan AFP dan CTC boleh meningkatkan pengesanan HCC.45 CTC dianggap mempunyai kelebihan berbanding AFP dalam saringan awal kumpulan.dengan risiko HCC yang tinggi.Walau bagaimanapun, pengesanan gabungan berasaskan penanda bagi CTC boleh meningkatkan peratusan hasil positif.54 Campuran antibodi anti-ASGPR dan CPS1 mencapai kadar pengesanan CTC sebanyak 91% pada pesakit dengan HCC.63 Zhang et al.menggunakan cip CTC dengan antibodi terhadap ASGPR, P-CK dan CPS1 dan pesakit yang dibezakan dengan HCC daripada penyakit hati benigna dan bukan HCC dengan 100%.64 Kajian Wang mengenal pasti 60% daripada EpCAM+ CTC dalam 42 pesakit HCC dan mendapati korelasi yang signifikan antara kejadian dan bilangan CTC pada peringkat TNM. 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，敏分升高，敏分升高，敏分升高，敏分升高，敏亄中名名患者中。值为20 ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者,, CTC 衍生 PCR 评分, 敏感性 为 72.5%, 95.0%,截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 的 特异性 为 57.0% 和 90.0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. mendapati bahawa dalam 125/171 (73%) pesakit dengan tahap AFP <20 ng/mL, nilai PCR yang diperolehi CTC telah dinaikkan dengan kepekaan 72.5% dan kekhususan 95.0%, manakala AFP berada pada kekhususan cut-off. ialah 20 ng/mL.ml ialah 57.0% dan 90.0%.66 Gabungan ORP dan CTC meningkatkan pengesanan HCC.45 CTC dianggap lebih baik daripada AFP dalam saringan awal populasi HCC berisiko tinggi.Oleh itu, untuk kumpulan HCC yang positif dan berisiko tinggi CTC, ujian CTC harus digabungkan secara rutin dengan pengesanan ultrasound dan AFP.Walau bagaimanapun, CTC dianggap sebagai peramal penting metastasis tumor dan berulang, dan pengesanan CTC tidak disyorkan secara bebas sebagai alat diagnostik.62 Oleh itu, CTC boleh berfungsi sebagai biomarker ramalan yang lebih baik daripada penanda lain yang digunakan pada masa ini. Zhou et al mendapati bahawa pesakit yang mempunyai bilangan EpCAM+ CTC dan sel T pengawalseliaan yang tinggi menunjukkan risiko yang lebih tinggi untuk mengalami kambuhan HCC, berbanding mereka yang mempunyai bilangan CTC yang rendah, dengan nisbah berulang 66.7% berbanding 10.3% (P <0.001).67 Kajian serupa dilaporkan oleh Zhong et al.68 Selain itu, Qi mendapati bahawa 101 daripada 112 pesakit (90.81%) dengan HCC, termasuk mereka yang mempunyai penyakit peringkat awal, positif untuk CTC dan nodul HCC yang sangat kecil dikesan selepas 3 hingga 5 bulan susulan. Zhou et al mendapati bahawa pesakit yang mempunyai bilangan EpCAM+ CTC dan sel T pengawalseliaan yang tinggi menunjukkan risiko yang lebih tinggi untuk mengalami kambuhan HCC berbanding mereka yang mempunyai bilangan CTC yang rendah, dengan nisbah berulang 66.7% berbanding 10.3% (P <0.001).67 A kajian serupa dilaporkan oleh Zhong et al.68 Selain itu, Qi mendapati bahawa 101 daripada 112 pesakit (90.81%) dengan HCC, termasuk mereka yang mempunyai penyakit peringkat awal, positif untuk CTC dan nodul HCC yang sangat kecil dikesan selepas 3 hingga 5 bulan susulan. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al mendapati bahawa pesakit dengan EpCAM+ CTC dan sel T pengawalseliaan yang tinggi mempunyai risiko yang lebih tinggi untuk HCC berulang daripada mereka yang mempunyai CTC yang rendah, dengan kadar pengulangan 66.7% vs 10.3% (P<0.001 )67.Kajian serupa telah dijalankan oleh Zhong et al.68. Di samping itu, Qi mendapati bahawa 101 daripada 112 pesakit (90.81%) dengan HCC, termasuk mereka yang mempunyai penyakit awal, mempunyai CTC, dan nodul HCC yang sangat kecil dikesan selepas 3 hingga 5 bulan susulan. Zhou 等 人 发现, 与 ctc 数量 较 少 的 患者 相比, Epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 数量 升高 的 患者 发生 发生 发生 复发 复发 的 风险 高 高 高 为 为 和 和 和 和 和 和 和 和 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比, Epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 发生 发生 复发 风险 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为p <0.001) ……………….. Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.mendapati bahawa pesakit dengan peningkatan EpCAM + CTC dan sel T pengawalseliaan mempunyai risiko yang lebih tinggi untuk berulang HCC berbanding dengan pesakit dengan CTC yang lebih sedikit, dengan kadar berulang masing-masing 66.7% dan 10.3% (P <0.001).Kajian serupa dilaporkan oleh Zhong et al.68 Di samping itu, Qi mendapati bahawa 101 daripada 112 pesakit HCC (90.81%), termasuk pesakit dengan penyakit awal, mempunyai keputusan CTC yang positif dan mendapati nodul HCC yang sangat kecil selepas 3 lawatan.Pemerhatian sehingga 5 bulan.Mereka juga menemui CTC dalam 12 pesakit dengan jangkitan HBV kronik dan menemui tumor HCC kecil dalam tempoh 5 bulan dalam 2 pesakit CTC-positif.69 Oleh itu, CTC boleh digunakan untuk meramalkan HCC, 70 tetapi ia boleh digunakan dengan lebih rutin sebagai biomarker ramalan.
Seperti cfDNA, cfRNA dilepaskan ke dalam aliran darah melalui pelbagai sistem.Molekul-molekul dalam darah periferi ini mewakili tisu kanser asal.Berbanding dengan penanda yang dikesan oleh kaedah bukan invasif, cfRNA lebih dikawal secara dinamik, khusus tisu, dan banyak dalam persekitaran ekstraselular.Kepentingan dan nilai diagnostik 71 miRNA (miRNA) dalam HCC telah dilaporkan dalam banyak kajian.miRNA ialah RNA bukan pengekodan endogen (ncRNA) yang mengawal pelbagai aktiviti biologi molekul dengan menghalang terjemahan RNA messenger sasaran (mRNA).miRNA terletak dalam badan apoptosis yang terkandung dalam eksosom, tetapi ia juga boleh mengikat secara stabil kepada protein serum dan lipid dalam darah periferal dan boleh digunakan untuk menilai HCC.mikroRNA terlibat dalam penjanaan semula hati, metabolisme lipid, apoptosis, keradangan, dan perkembangan HCC.72 MiRNA onkogenik seperti miR-21, miR-155 dan miR-221 terkenal di HCC.Khususnya, miR-21 memainkan peranan penting dalam sintesis kolagen dalam matriks ekstraselular dan fibrosis dan menggalakkan hepatokarsinogenesis dengan mengaktifkan sel stem hematopoietik.72,73 miRNA penindas tumor dalam HCC termasuk miRNA-122, miRNA-29, keluarga Let-7, dan keluarga miRNA-15.Keluarga Let-7 terdiri daripada banyak miRNA penindas tumor yang menyasarkan keluarga RAS.Keluarga miR-15 termasuk miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 dan miR-497, yang mempunyai urutan pelengkap untuk mRNA tertentu.Di samping itu, RNA bukan pengekodan panjang (lncRNAs) dan RNA bulat (cirRNAs) juga penting untuk pemeriksaan awal HCC.lncRNA mewakili kelas ncRNA yang paling luas, termasuk ncRNA seperti mRNA, dan terlibat dalam patogenesis banyak penyakit manusia.LncRNA memainkan peranan pengawalseliaan dalam persekitaran mikro hati dan penyakit hati kronik.74 CircRNA juga merupakan kelas ncRNA dengan pelbagai fungsi dalam pengawalan ekspresi gen.Baru-baru ini, circRNA telah dianggap sebagai alat diagnostik untuk HCC.
RNA bebas yang beredar mempunyai kestabilan yang luar biasa, termasuk ketahanan terhadap suhu, pH, dan RNase, yang menjadikan pengasingan fnRNA daripada darah periferi kurang membosankan menggunakan kaedah penulenan RNA standard.Kaedah yang paling biasa digunakan termasuk NGS, microarray dan RT-qPCR.NGS membolehkan mikroRNA diukur sepanjang genom.Walau bagaimanapun, kaedah ini mahal dan analisisnya tidak diseragamkan.Sebaliknya, RT-qPCR adalah murah, menguatkan asid nukleik dengan cepat, dan menawarkan banyak kelebihan seperti kepekaan yang lebih tinggi, ketepatan yang lebih tinggi, julat dinamik yang lebih luas dan memerlukan sampel yang lebih sedikit.Microarrays ialah kaedah lain yang digunakan untuk pengesanan miRNA berdasarkan hibridisasi sensitif dan spesifik miRNA sasaran dengan probe DNA pelengkap, 75 tetapi analisis data microarray memakan masa.
Mengedarkan miR-122 dan Let-7 telah dilaporkan berpotensi berguna dalam mendiagnosis HCC peringkat awal dalam kumpulan berisiko tinggi, penanda pada pesakit dengan nodul premalignant yang berkaitan dengan HBV dan HCC peringkat awal.76 Cai et al.mendapati bahawa ahli keluarga Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 dan miR-199a/b) berisiko kronik HCC pada pesakit dengan hepatitis.Keluarga Let-7 boleh berfungsi sebagai biomarker pengganti yang berkesan untuk meramalkan perkembangan HCC dalam kumpulan berisiko tinggi yang dikaitkan dengan hepatitis C kronik. 77 miR-122 mempunyai ketepatan diagnostik yang tinggi dalam mengesan HCC awal pada pesakit dengan sirosis hati.78 Serum yang beredar MiR-107 juga telah dinilai pada peringkat awal HCC, 79 dan telah menunjukkan potensi yang baik dalam populasi berisiko tinggi.Zhou et al melaporkan bahawa panel miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a dan miR-801) boleh membezakan HCC daripada hepatitis B kronik (CHB) dan sirosis. sensitiviti adalah 79.1% dan 75%, dan kekhususan masing-masing 76.4% dan 91.1%.80 Dalam HCC berkaitan HBV, kami mendapati tahap miR150 telah berkurangan dengan ketara berbanding dengan pesakit HBV kronik tanpa HCC (sensitiviti 79.1%, kekhususan 76.5%).-224 telah dinaikkan dalam HCC berbanding dengan kawalan sihat, dan analisis subkumpulan menunjukkan tahap yang lebih tinggi pada pesakit dengan HCC yang dikaitkan dengan HBV.sirosis berkaitan hepatitis B dan pesakit HCC mengenal pasti pengelas siRNA yang mengandungi tujuh siRNA yang dinyatakan secara berbeza yang boleh mengesan HCC dalam kawalan yang berbeza;Julat AUC pada pemeriksaan awal adalah lebih baik daripada sukarelawan AFP.Mereka mendapati bahawa empat miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p, dan miR-365a-3p) boleh membezakan pesakit dengan HCC daripada pesakit tanpa HCC.Lima miRNA yang terlalu mengekspresikan (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p dan miR-148a-3p) dianggap berpotensi jangkitan HBV dalam HCC, sirosis dan biomarker CHB, terutamanya miR-34a-5p mungkin biomarker untuk sirosis hati, 85 dan mungkin biomarker berpotensi untuk pemeriksaan awal HCC dalam populasi berisiko tinggi.lncRNA yang paling banyak dikaji dalam HCC sangat diaktifkan dalam kanser hati (HULC).Kajian lain menunjukkan bahawa HULC yang beredar dalam pesakit HCC boleh digunakan sebagai penanda diagnostik kerana lncRNA ini sangat dikawal dalam pesakit HCC berbanding individu yang sihat.71,86 Antara lnRNA lain, LINC00152 dianggap sebagai lncRNA diagnostik terbaik kerana AUC, sensitiviti dan kekhususannya yang tinggi.86 Dalam satu kajian, ekspresi darah periferi LINC00152 secara beransur-ansur meningkat daripada kawalan sihat normal kepada pesakit dengan CHB dan sirosis, dan akhirnya tertinggi dalam HCC.Kajian mengenai ekspresi circSMMARCA5 dalam plasma pesakit dengan HCC telah menunjukkan penurunan progresif dalam ekspresi dalam HCC dari hepatitis kepada sirosis dan lesi prakanser.87 Analisis keluk ROC mengesahkan potensi circRNA ini dalam membezakan pesakit dengan hepatitis atau sirosis hati daripada mereka yang mempunyai HCC, terutamanya mereka yang mempunyai tahap AFP di bawah 200 ng/mL.Di samping itu, Zhu menganalisis 13, 617 RNA kitaran dalam sampel plasma daripada pesakit HCC yang berkaitan dengan HBV dan mengesahkan bahawa 6 RNA kitaran dinyatakan secara berbeza dalam sirosis berkaitan HCC dan HBV, menunjukkan bahawa cRNA mungkin bermanfaat.penanda untuk pemeriksaan awal kumpulan berisiko tinggi seperti yang berkaitan dengan penyakit hati, pesakit sklerosis.88
Eksosom ialah vesikel membran berdiameter 40–160 nm;pelbagai vesikel intrasel bercantum dengan membran sel dan dilepaskan ke dalam matriks ekstraselular.Ia mengandungi banyak komponen aktif, termasuk lipid, protein, RNA dan DNA, dan memainkan peranan penting dalam komunikasi antara sel, kedua-dua sel HCC dan bukan HCC.89,90 Exosom mengawal perkembangan HCC dengan mengaktifkan fibroblas hepatosit dan sel stellate, sel imun, hepatosit normal dan sel HCC.91 Dalam persekitaran mikro tumor, sel tumor menghasilkan sejumlah besar eksosom yang dibawa dari sel kanser ke sel yang tidak matang, yang seterusnya terlibat dalam onkogenesis, degradasi, dan isyarat selular.92 Kajian telah menunjukkan bahawa eksosom boleh memindahkan onkogen ke sel normal semasa proses patologi, yang mungkin merupakan salah satu mekanisme pencerobohan tumor dan metastasis.93 Peranan eksosom dalam perkembangan kanser mungkin dinamik dan khusus untuk jenis kanser, 89 Eksosom boleh dihayati oleh sel bersebelahan atau jauh untuk mengawal selia berbilang gen sasaran dalam sel penerima yang mungkin terlibat dalam ion komunikasi antara sel dan interaksi persekitaran mikro selular, ia mungkin pengantara isyarat selular dan metabolisme.94 Ciri dan perubahan dinamik molekul kargo eksosom secara langsung mencerminkan ciri dan perubahan dinamik sel tumor ibu bapa, 95 yang juga merupakan asas untuk penggunaan eksosom dalam diagnosis dan prognosis kanser, serta untuk meramalkan tindak balas individu terhadap terapi antikanser. ..96
Kaedah makmal tradisional untuk mengasingkan dan menganalisis eksosom adalah kompleks, berbilang langkah dan memakan masa, termasuk ultrasentrifugasi, penapisan, kromatografi pengecualian saiz, penulenan immunoaffinity, Western blotting, ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA), PCR dan analisis aliran.sistem miniatur dan platform makmal pada cip menggunakan mikro/teknologi nano sedang dibangunkan secara meluas untuk pengasingan in situ yang pantas dan mudah bagi eksosom.Analisis pengesanan zarah nano (NTA) ialah kaedah yang digunakan secara meluas untuk mencirikan saiz dan kepekatan eksosom, termasuk kaedah seperti zarah nano magnetik dan polihidroksialkanoat.Kaedah mikrobendalir dan elektrokimia juga boleh mengesan eksosom dengan cepat dalam hasil yang tinggi.
Protein eksosomal adalah penanda penting untuk diagnosis HCC.Dalam kajian Arbelaiz, tahap 98 protein pengikat RasGAP SH3 (G3BP) dan reseptor imunoglobulin polimer (PIGR) telah meningkat dengan ketara dalam eksosom yang berasal dari HCC, dan keberkesanan gabungan kedua-dua protein itu lebih tinggi daripada AFP.Beban besi adalah faktor penting yang menyumbang kepada pembangunan HCC.Tseng melaporkan bahawa hepcidin mungkin memainkan peranan penting dalam penentangan terhadap HCC.99 Eksosom yang diperoleh daripada sera pesakit HCC mempunyai bilangan salinan mRNA hepcidin yang lebih tinggi daripada rakan sejawat mereka yang sihat, menunjukkan bahawa hepcidin mungkin merupakan biomarker diagnostik baru untuk HCC.Protein 14-3-3ζ dalam eksosom yang dihasilkan oleh 100 HCC boleh mengurangkan pengaktifan, percambahan dan pembezaan sel T dan boleh mendorong transformasi sel T kepada sel T pengawalseliaan, mengakibatkan pengurangan sel T.101 Ini disokong oleh beberapa kajian yang menyiasat pengelakan tumor daripada pengawasan imun, 102 yang mungkin menyumbang kepada tumorigenesis HCC.
Sebagai tambahan kepada kehadiran ecRNA dalam plasma atau serum, eksosom yang diperkaya RNA boleh digunakan untuk pementasan masa nyata bukan invasif dalam pemeriksaan tumor awal dan untuk menentukan evolusi tumor dan tindak balas kepada terapi.Tahap miRNA-21 eksosomal dalam serum darah dalam kumpulan HCC adalah 2.21 kali lebih tinggi daripada kumpulan CHB, dan dalam kumpulan HCC ia adalah 5.57 kali lebih tinggi daripada populasi yang sihat.Dalam kajian Wang, eksosom meningkat dengan ketara HCC berbanding pesakit sirosis dengan nilai AUC 0.83 (95% CI 0.74–0.93) dan 0.94 (95% CI 0.88–1.00).104 Data yang diperolehi menjelaskan penglibatan molekul kargo eksosomal tertentu dalam pengawalan onkogenesis dan perkembangan HCC.105 Ekspresi serum miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 dan miR-26a adalah konsisten.dan metastasis, dan tahap miR21 adalah lebih tinggi pada pesakit HCC berbanding kawalan sihat dan juga pada pesakit CHB.102 LncRNA mempunyai potensi nilai diagnostik dalam HCC.Kajian telah menunjukkan bahawa eksosom yang diperoleh daripada sera pesakit HCC mempunyai tahap LINC00161, LINC000635, dan lncRNA yang lebih tinggi dengan ketara dengan mengubah faktor pertumbuhan-β berbanding pesakit tanpa HCC, dan lncRNA ini sangat dikaitkan dengan peringkat TNM dan jumlah tumor.110 Conigliaro et al.Eksosom CD90+ didapati mengekspresikan tahap lncRNAH19 yang tinggi, yang meningkatkan pembebasan faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF) dan pengeluaran reseptor VEGF-R1 dengan ketara, dengan itu merangsang angiogenesis.93 CircRNA ialah satu lagi jenis ncRNA eksosomal - dinyatakan pada tahap yang lebih rendah tetapi stabil merentas spesies, circRNA juga menunjukkan kekhususan untuk jenis sel, jenis tisu, peringkat perkembangan dan aktiviti kawal selia.111 circRNA adalah biomarker diagnostik untuk kanser invasif awal dan minimum.112 Ujian klinikal terkini telah menunjukkan bahawa kekhususan miRNA individu dalam meramalkan HCC adalah tidak ideal.Oleh itu, pengesanan kompleks menggunakan ujian berbilang (cth, miR-122 dan miR-48a dalam kombinasi dengan AFP) boleh meningkatkan pengenalpastian awal HCC dan pembezaan HCC daripada sirosis.100
Pesakit dengan CHB dan sirosis hati adalah kumpulan berisiko tinggi yang paling biasa untuk membangunkan HCC.Bagi kumpulan berisiko tinggi, sebaik sahaja tindak balas virologi yang berterusan telah dicapai, strategi pengawasan kos efektif berdasarkan risiko HCC harus dibangunkan, dan pemeriksaan awal adalah kunci untuk meningkatkan diagnosis dan rawatan HCC dengan nisbah keberkesanan kos yang tinggi2 ..Kaedah saringan awal untuk kanser mempunyai banyak batasan: kaedah saringan awal yang berkesan belum dibangunkan untuk kebanyakan jenis kanser, dan pematuhan biasanya rendah.Berbanding dengan kaedah pemeriksaan awal tradisional, teknologi biopsi cecair mempunyai kelebihan yang jelas: kemudahan pensampelan, pengesanan panrac, kebolehulangan sampel yang baik, dan tindak balas yang berkesan terhadap heterogeniti tumor.Memandangkan keberkesanan kos kaedah yang berkaitan dengan biopsi cecair, penggunaannya dalam pemeriksaan HCC belum diuji secara rutin.Walaupun kemajuan dalam pengesanan tepat pada peringkat molekul, biopsi cecair adalah mahal untuk mengesan HCC dalam pesakit sasaran, mengehadkan penggunaannya secara meluas berbanding dengan prosedur pengimejan khusus seperti ultrasound dan pengimejan resonans magnetik.113,114 Walau bagaimanapun, kajian terdahulu menunjukkan bahawa biopsi cecair menunjukkan manfaat yang ketara dari segi tahun hayat terlaras kualiti (QALYs).115 Faedah biopsi cecair dalam karsinoma awal perut dan nasofaring juga telah ditunjukkan.116,117 Pandangan semasa ialah biopsi cecair boleh melengkapkan biomarker serum dan pemeriksaan radiologi dalam pengesanan dan diagnosis tumor.117 118
Menurut kesusasteraan semasa, teknologi biopsi cecair telah menunjukkan sensitiviti dan kekhususan yang jauh lebih tinggi dalam pemeriksaan awal kumpulan berisiko tinggi untuk kanser hati.Tidak kira jenis biopsi cecair, ia boleh membezakan HCC daripada individu berisiko tinggi tanpa HCC, mencadangkan kepentingan pemeriksaan awal kerana perbezaan antara individu berisiko tinggi dan sihat adalah jelas.ctDNA mempunyai separuh hayat yang pendek dan boleh digunakan untuk mengesan HCC, jadi sebarang perubahan dalam cDNA yang berasal dari tumor boleh memberikan bukti konkrit masa nyata tentang perkembangan tumor, terutamanya untuk tumor kecil.Tahap ctDNA yang tinggi menunjukkan perkembangan dan penyebaran kanser dan merupakan penunjuk awal perkembangan dan berulang.Di samping itu, berdasarkan keputusan ctDNA, pesakit boleh menerima rawatan individu dan susulan.119 Tapak metilasi tertentu mungkin merupakan penanda yang lebih baik daripada AFP untuk pengecaman awal HCC dan nodul sirosis.Dalam kes HCC yang boleh direseksi, tahap cDNA yang tinggi menunjukkan pencerobohan mikrovaskular dan pengulangan dan metastasis selepas pembedahan.Perubahan dalam nombor salinan dikaitkan dengan kemandirian pesakit dengan HCC.Ia boleh diandaikan bahawa penilaian cDNA mungkin terlibat dalam rawatan keseluruhan HCC, dan cDNA boleh berfungsi sebagai penunjuk modulasi terapeutik yang berkesan.Penanda berdasarkan mutasi genetik tertentu dalam ctDNA telah diterima pakai oleh garis panduan klinikal untuk meramalkan keberkesanan dan memantau rintangan dadah.Ujian ctDNA mungkin merupakan alat biopsi cecair yang paling berguna untuk pemeriksaan awal.CTC juga memainkan peranan penting dalam saringan awal kumpulan HCC berisiko tinggi.Pelbagai penanda CTC berkaitan HCC adalah amat penting dalam permulaan, pembangunan dan pengulangan HCC.Sebagai vesikel membran, eksosom terlibat dalam komunikasi antara sel, terutamanya dalam sel HCC.MikroRNA yang beredar adalah stabil dalam darah dan oleh itu mungkin lebih berguna untuk pemeriksaan awal HCC.Secara beransur-ansur, protein eksosom dan eksosom kaya RNA ditemui, dan keberkesanan ramalan mereka untuk HCC telah disahkan.Menariknya, etiologi HCC yang berbeza mungkin juga dikaitkan dengan mutasi yang berbeza, jadi kami boleh memilih biomarker yang berbeza untuk pemeriksaan awal berdasarkan etiologi HCC yang berbeza.120
Walau bagaimanapun, teknik biopsi cecair semasa boleh dipersoalkan dari segi kestabilan dan tidak boleh melakukan pemeriksaan awal atau pemantauan HCC secara bebas, tetapi masih boleh melengkapkan pemeriksaan dan diagnosis individu.121 Sebagai satu bentuk biopsi cecair, pengesanan dan pengimejan ctDNA, CTC, cfRNA dan AFP atau PIVKA-II yang berkaitan eksosom mempunyai aplikasi yang menjanjikan dalam diagnosis awal dan prognosis HCC.Walau bagaimanapun, mekanisme sebenar pelepasan ctDNA ke dalam darah masih perlu dijelaskan.Mendedahkan sifat biologi asas ctDNA boleh memudahkan penggunaannya sebagai penanda.Jumlah kecil ctDNA dalam edaran dan keperluan pengendalian sampel yang ketat merupakan cabaran untuk pelaksanaan klinikal pengesanan cDNA dalam HCC.Di samping itu, mutasi genetik tidak mempunyai ciri khusus yang membolehkan pengenalpastian tepat karsinogen.Oleh kerana pelbagai variasi genetik dan somatik juga terdapat dalam tisu normal, mutasi genetik yang dikenal pasti oleh biopsi cecair mungkin mempunyai kegunaan terhad dalam pemeriksaan awal untuk HCC.122 Had sasaran gen berguna yang ditakrifkan dengan baik dan biomarker yang membantu membezakan cDNA daripada DNA bukan tumor adalah isu paling penting dalam penggunaan cDNA.kekurangan kegunaan penanda sensitif dan khusus untuk pengesanan CTC.Hanya sel yang berdaya maju dengan potensi metastatik ditemui, dan gabungan optimum penanda diperkaya CSC tidak jelas.Pengasingan CTC untuk budaya dan penilaian profil mutasi mereka juga merupakan tugas yang mencabar.Disebabkan masalah dengan pengenalpastian, pengasingan dan penulenan eksosom, mekanisme molekul tertentu masih tidak jelas, dan kajian terdahulu tentang mekanisme eksosom dan HCC belum mendalam, dan cara miRNA, lncRNA dan protein disusun mengikut eksosom. , dan tidak jelas sama ada pengambilan eksosom ialah proses jenis tertentu.Penggunaan eksosom untuk diagnosis dan rawatan HCC masih di peringkat praklinikal.Kekurangan penyeragaman prosedur biopsi cecair, seperti jenis tiub yang digunakan untuk mengumpul darah, isipadu darah, penyimpanan dan pengesanan sampel, pengasingan dan pengayaan, mungkin menghalang penggunaannya dalam amalan klinikal rutin kerana perbezaan amalan di seluruh pusat perubatan.Keberkesanan biopsi cecair dalam pemeriksaan awal, diagnosis, penilaian keberkesanan, dan ramalan HCC masih perlu diterokai, terutamanya untuk kumpulan berisiko tinggi.Teknologi biopsi cecair mempunyai potensi besar dan dijangka akan digunakan secara meluas dalam amalan klinikal kanser hati dalam masa terdekat.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Statistik Kanser Global 2020: GLOBOCAN menganggarkan kejadian dan kematian daripada 36 jenis kanser di 185 negara.CA Kanser J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Ibu Pejabat Suruhanjaya Kesihatan Negara.Kriteria untuk diagnosis dan rawatan kanser hati primer (edisi 2022) [J].Jurnal Penyakit Hati Klinikal, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Garis panduan untuk diagnosis dan rawatan karsinoma hepatoselular (edisi 2019).Kanser hati.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Garis panduan amalan klinikal untuk karsinoma hepatoselular: Persatuan Penyakit Hati Jepun, 2017 (garis panduan ke-4 JSH-HCC), kemas kini 2019.Takungan Penyakit Hati.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biopsi cecair dalam penyakit hati kronik.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biopsi kanser payudara cecair: tinjauan terfokus.Makmal Arch Pathol Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Pengawasan untuk karsinoma hepatoselular: amalan terbaik semasa dan hala tuju masa hadapan.Gastroenterologi.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Persatuan Penyelidikan Eropah L, Organisasi Eropah R, C Therapeutics.Garis panduan klinikal EASL-EORTC: rawatan karsinoma hepatoselular.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Analisis gabungan AFP dan HCCR-1 sebagai penanda serologi berguna dalam karsinoma hepatoselular kecil: kajian kohort prospektif.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Ekspresi pembezaan plasma microRNA-125b dalam penyakit hati yang berkaitan dengan virus hepatitis B dan potensi diagnostik karsinoma hepatoselular yang disebabkan oleh virus hepatitis B.Takungan penyakit hati.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologi dan kepentingan alpha-fetoprotein dalam karsinoma hepatoselular.Int hati.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Garis panduan klinikal untuk rawatan karsinoma hepatoselular di rantau Asia-Pasifik: kemas kini 2017.Pertubuhan Antarabangsa untuk Penyakit Hati.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Nilai diagnostik serum PIVKA-II sahaja atau digabungkan dengan AFP pada pesakit Cina dengan karsinoma hepatoselular.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Kanser paru-paru bukan sel kecil biopsi cecair humoral bukan plasma: lebih dekat dengan tumor!sel.2020;9(11).doi: 10.3390/sel9112486
15. Mader S, Pantel K. Biopsi cecair: status semasa dan prospek masa depan.Rawatan Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biopsi kanser berasaskan cecair: alat diagnostik multimodal dalam onkologi klinikal.The Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Asid nukleik dalam plasma manusia.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Pengesanan lanjutan DNA tumor yang beredar melalui analisis saiz serpihan.Sains menterjemah perubatan.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Panjang serpihan DNA tumor yang beredar.gen PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. DNA tumor beredar: biomarker yang menjanjikan dalam biopsi kanser berasaskan cecair.tumor sasaran.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Pengesanan DNA tumor yang beredar pada peringkat awal dan akhir keganasan manusia.Sains menterjemah perubatan.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Biopsi cecair untuk analisis ramalan mutasi kanser pepejal: perspektif ahli patologi.J Bioteknologi.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Pengesanan tumor awal dengan mengedarkan pemeriksaan DNA plasma: gembar-gembur atau harapan?Undang-undang klinikal Belgium.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Kesan virus hepatitis dan penuaan pada metilasi DNA dalam hepatokarsinogenesis manusia.Histopatologi.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647